男，漢族,，1966年2月生,，湖北天門人,，1994至1999羅牛山桂林洋豬場飼養(yǎng)員，技術(shù)員,，副場長,，1999至2003浙江方立嶺豬場場長，2003至2012年5月四川五丁集團養(yǎng)豬技術(shù)部經(jīng)理（技術(shù)總監(jiān)）,，09年訪問學(xué)者到韓國金浦短暫學(xué)習(xí)（金浦是首爾的豬肉供應(yīng)基地）發(fā)表論文多篇,，其間新希望廣漢事業(yè)部授課，培訓(xùn)多名場長,，配種員,。2012年至2018年6月自主創(chuàng)業(yè)基礎(chǔ)母豬450頭，循環(huán)生產(chǎn)年出售商品豬1.1萬頭，因環(huán)保豬場離天南長渠不足200米拆掉,，2019年2月入職某邦湖北戰(zhàn)區(qū)門湖5000頭母豬場長,，批次化生產(chǎn)，年供應(yīng)商品豬12萬頭,，全程料肉比（母豬料平攤育成豬上）3.0：1,。本人在集團管理框架下，注重生產(chǎn)一線宏觀統(tǒng)籌,，微觀細化,，注重團隊建設(shè)，培養(yǎng)員工認知,，判斷,，決策，處置,，驅(qū)動能力,。2022年3月入職新希望六和。
非洲豬瘟1921年在非洲肯尼亞首次發(fā)現(xiàn),，同年蔓延非洲東,，南七個國家，1950年傳入西非,，1957年歐洲,，1971年古巴，隨后南美洲大部分國家暴發(fā)疫情,，2007年傳入高加索地區(qū),，2012年烏克蘭，2013年白俄羅斯,，2014年波蘭,，拉脫維亞，愛沙尼亞,，2017年傳入捷克,，羅馬尼亞，2018年8月傳入我國（我國境內(nèi)的非洲豬瘟屬基因ll型,，與格魯吉亞，俄羅斯,，波蘭公布的毒株全基因序列同源性高度重合）,，給我國養(yǎng)豬事業(yè)帶來很大的沖擊，很多養(yǎng)豬企業(yè)或散戶永遠留在了黎明前,，有的企業(yè),，特別是養(yǎng)豬大財團看到非洲豬瘟帶來市場紅利（我國每年需消費6.5億頭商品豬，市值規(guī)模1.2萬億左右，2019年市值規(guī)模1.6萬億多,，2020年生豬出欄5.4億頭,，市值規(guī)模2.3萬億）豬企紛紛硬件升級，把生物安全作為第一大工具 當(dāng)它得到精細實施和制度執(zhí)行時,，豬企越來越有能力將ASFV控制在門外,。
ASF的特點
非洲豬瘟是家豬，疣豬,，野豬的一種傳染性極強的出血性疾病,，所有年齡段的豬易感，不傳染人,。
可表現(xiàn)為特急性,，急性，亞急性,，慢性四種形式,。嚴重程度與毒株，豬種及流行時間的長短有關(guān),，急性型以高燒,，食欲廢絕，皮膚發(fā)紺,，網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)出血為特征,，發(fā)病2到10天內(nèi)死亡，病死率高達100%,，亞急性,，慢性死亡率70%左右。臨床上,，與古典豬瘟非常相似,。
非洲豬瘟的病原學(xué)特性：
（1）基本屬性
非洲豬瘟屬于非洲豬瘟病毒屬，非洲豬瘟病毒科,，組成結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜一大基因組雙股DNA囊膜病毒,，類似痘病毒和皰疹病毒，具痘病毒的某些特性,。
（2）型態(tài)結(jié)構(gòu)
非洲豬瘟有5層,，外膜（脂質(zhì)層），衣殼,，雙層內(nèi)膜,，核心殼層和基因組。結(jié)構(gòu)特征,，包含3萬余個蛋白亞基組裝成直徑為200nm（1納米相當(dāng)4倍原子大小,，約相當(dāng)于頭發(fā)直徑的一萬分之一）的球形顆粒,，是目前原子分辨率結(jié)構(gòu)得到解析的最大病毒顆粒。
非洲豬瘟病毒是一種有囊膜,，單分子線狀雙股DNA病毒,，二十面體對稱，六角形外觀,，復(fù)雜多層結(jié)構(gòu),，外被囊膜，內(nèi)有核衣殼,，中部為高電子密度核心,，直徑約80nm，核心外圍包裹由P37,，P34,，P150等多種蛋白組成的核心衣殼，其外側(cè)是源自內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的內(nèi)囊膜和圍繞在內(nèi)囊膜周圍的病毒衣殼,。
（3）基因組結(jié)構(gòu)
ASFV是唯一己知核酸為DNA的蟲媒病毒,，只有一個血清型，可分24個基因型,，ASFV基因組末端共價閉合,，呈發(fā)卡結(jié)構(gòu)，含有反向重復(fù)序列以及早期合成所必需的酶,，整個基因組長度約170—192Kb（即千堿基：指某段DNA分子中含有一千個堿基）,，整個基因組有150—167個開放閱讀框（ORF）其編碼的蛋白中有131種病毒蛋白的結(jié)構(gòu)和功能（以有報道）。
（4）主要基因及表達蛋白
病毒主要由蛋白質(zhì)和核酸組成,，病毒的大多數(shù)功能由蛋白質(zhì)直接行使ASFV有超過50個結(jié)構(gòu)蛋白,，行使各種各樣的功能，包括病毒形態(tài)的維持,，病毒吸附與入侵宿主細胞,，病毒的復(fù)制，病毒對宿主細胞代謝的調(diào)控,，免疫逃避等,，ASFV為雙囊膜病毒，病毒粒子由內(nèi)而外的組成依次是類核,，內(nèi)核芯殼,，內(nèi)囊膜，核衣殼和外襄膜,。
表達蛋白：CD2V外囊膜蛋白,，分子質(zhì)量大小105KU（K表示千，U為原子質(zhì)量單位）,，CD2V蛋白表達后以跨膜蛋白的形式存在,，細胞膜表面部分的CD2v蛋白與宿主T淋巴細胞表面特有的CD2蛋白共享2個預(yù)測的免疫球蛋白超家族結(jié)構(gòu)域，大多數(shù)CD2v蛋白分布在細胞質(zhì)中,，定位于細胞核周圍,，注：CD2v蛋白具有吸附紅細胞的特性，有研究表明CD2v蛋白能夠促進ASFV在蜱蟲體內(nèi)的復(fù)制,。
P72核衣殼蛋白,，分子質(zhì)量73KU，約占病毒蛋白總量的30%,，是病毒20面體衣殼結(jié)構(gòu)的主要組成成分,，P72蛋白在宿主細胞內(nèi)合成后分布于細胞質(zhì)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的囊泡中，P72蛋白形成20面體結(jié)構(gòu)時需要如P49等蛋白的輔助,，輔助蛋白的缺失會導(dǎo)致核衣殼正20面體的出現(xiàn)異常,。由于P72蛋白免疫原性強且穩(wěn)定，因此常用于建立血清學(xué)檢測方法,，也有許多基于P72基因建立的ASFV核酸檢測方法,，包括實時熒光定量PCR環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴增。
P30內(nèi)囊膜蛋白,，分子質(zhì)量為30KU,，ASFV感染早期，通過多種干擾宿主細胞的蛋白質(zhì)正常合成,，以促進病毒自身復(fù)制,，感染后2—4h產(chǎn)生，在整個感染期間持續(xù)表達,，目前P30被廣泛用于ASFV血清學(xué)檢測,，基于重組蛋白P30的ELISA及免疫印跡可以準確檢測ASFV抗體，具有極高的特異性和靈敏性,。
ASFV主要通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用或巨胞飲作用感染某豬單核巨噬細胞等免疫細胞為適應(yīng)宿主細胞,，ASFV編碼蛋白通過多種方式抑制宿主細胞的免疫系統(tǒng)，調(diào)控細胞的轉(zhuǎn)錄,，抑制宿主細胞的蛋白質(zhì)合成,，調(diào)節(jié)細胞凋亡從而為病毒自身在感染宿主細胞內(nèi)的繁殖及擴散創(chuàng)造最有利的條件。
以上三種蛋白是ASFV干擾宿主細胞正常代謝和免疫逃避的關(guān)鍵因素,，當(dāng)然ASFV有多個多基因家族蛋白,，其中MGF360/505/530決定于ASFV的細胞嗜性與病毒在巨噬細胞內(nèi)復(fù)制密切有關(guān)，是ASFV的毒力決定因素,，另外MGF360/505/530還參與抑制宿主干擾素的產(chǎn)生和調(diào)控炎性細胞因子表達,，并通過延長感染細胞的存活時間來提高病毒在宿主細胞內(nèi)的增殖效率和數(shù)量。
主要傳染源：感染的軟蜱,，鈍緣（媒介昆蟲）,，感染的家豬,，野豬，疣豬,。機械帶毒：鼠,，貓，蚊蠅,，鳥,，污染的飼料，設(shè)備,，工具,，水（有報道水蛭檢測帶毒時間73天）消化道和呼吸道是最主要的感染途徑。
傳播方式：接觸,，采食,，叮咬，工具,，注射,，配種精液，相對空氣傳播不大,，臨床有短距離疑是氣容膠傳染的個案,。
傳播慢，患病率低,，致死率高,，最低感染劑量：液體1TCTD50（提高豬只的免疫力也是防非的生物安全重要一環(huán)。
案例：A豬場
2019年10月臨床藍耳活躍抑制豬瘟,，偽狂,，圓環(huán)等基礎(chǔ)抗體，而基礎(chǔ)抗體高低與PED是有因果關(guān)系的,。A場在氣候沒變冷前在藍耳活躍情況下沒采取加強基礎(chǔ)免疫措施,，12月上旬該場發(fā)生PED，加上該場非瘟復(fù)產(chǎn)場,，非瘟病毒在泥土可成活很長時間,，雖然雨靴進豬舍踏了燒堿水，但雨靴底紋有機物并沒有干凈,，雨靴鞋套工作時很容易磨破,，異常豬很容易被PD淹蓋，1月10日R4棟D29首例確診非瘟陽性一頭到拔牙平穩(wěn),，基礎(chǔ)3600頭母豬群最后只剩923頭,。
案例：B豬場
2019年6月初有很多后備母豬（準備配種）咳嗽，喘氣,，獸醫(yī)定為傳胸,，保健藥物至穩(wěn)定,，6月20日開始出現(xiàn)產(chǎn)房母豬早產(chǎn)，技術(shù)員用頭孢類抗生素消炎治療,，第二天該母豬死亡,，連續(xù)幾天母豬死亡，加上樣品檢測非瘟陰性,，判斷死亡原因是傳胸引起的，7月5日該場13棟1欄一頭非瘟檢測陽性,，B豬場污染面過大,，2600頭基礎(chǔ)母豬群最后撥牙769頭，在檢測敏感性不強的情況下,，低病毒載量時標本實驗室就可能查不能,，如果核酸檢測呈陽性，宿主病毒載量就非常大,，污染幾率也增大,。平時在豬場管理中做好基礎(chǔ)免疫工作（其實很多豬場緊張非瘟的困擾，更受到常規(guī)病毒如藍耳,，圓環(huán),，PED等困擾，任何一種病的發(fā)生就增加物,，人的流動）
長期田間總結(jié)：控藍耳高致病活疫苗十抗生素保健,，改藍耳弱毒疫苗或者滅活苗，提示：中國早期藍耳滅活苗由于抗原低,，應(yīng)激大等原因2010年退出市場,，2019年有新的滅活苗上市，強毒活疫苗（長時間使用易毒力反強）轉(zhuǎn)換弱毒苗需做小面積試驗或者測序,。
田間證實豬群藍耳抗體頻率呈正態(tài)分布且N蛋白抗體S/P值<2.5,，表明豬群藍耳處于穩(wěn)定狀態(tài)，其它基礎(chǔ)免疫抗體水平就越高（基礎(chǔ)免疫高效疫苗的標準：毒株匹配性好,，抗原含量合理,，純凈度，同源性好,。
如果疫苗雜蛋白多,，所帶來的后果：應(yīng)激大，干擾免疫應(yīng)答,，影響免疫效果,，降低豬只生產(chǎn)性能這也不利于防非）田間證實：母豬每年基礎(chǔ)免疫增加普打二或三次支原體疫苗，因為豬胸腺是產(chǎn)生丅細胞的重要器官,，如果豬群正常,，健康,，平穩(wěn)生產(chǎn)，生物安全工作扎實穩(wěn)妥,，就不會犯其它疫病帶來麻痹大意）飼料：10的4次立方TCTD50
病毒活性：在適宜的蛋白環(huán)境中能夠在較大范圍的溫度和PH范圍存活,。病毒抵抗力較強，凍肉狀態(tài)存活數(shù)十年,，4℃存活一年以上,，常溫存活數(shù)周，56℃存活70分鐘,，60℃存活20分鐘,，80℃存活3分鐘，無血清時在PH3.5—12的環(huán)境中保持穩(wěn)定,，有血清時在PH3—13環(huán)境中保持穩(wěn)定,，PH13環(huán)境下沒血清可存活21h，有血清能存活7天,。（有報道：糞便和尿中感染存活時間：4度分別為8.48天和5.33天,，37度分別為3.71天和2.88天）。泥巴表面可存活3到4天,，有報導(dǎo)非瘟病毒在地表深20㎝處存活一年的記錄,。
殺滅方式：火，病毒最怕高溫,，考慮熱傳導(dǎo)作用時間,，注意防火安全。熏蒸：不要疊堆,，注意密封與作用時長,。靜置，紫外線對非洲豬瘟病毒核酸有很好的降解作用,，靜置（需消殺過后干燥）作用時間10天以上,，可以把物質(zhì)提前采購。5—20mg/L臭氧水可在1分鐘將ASFⅤ滅活,，表明臭氧水可用非洲豬瘟有效消毒劑,，但還沒有在豬場大面積使用?？諝膺^濾或水過濾很少有豬場做,，任何消毒注意它的作用時間，有機物嚴重干擾消毒效果,，碘與陽離子表面活性劑,，非離子表面活性劑相容性好。
有效消毒劑的評價：滅殺ASFV核酸效果的測定，實驗結(jié)果：臭氧和紫外消毒受遮擋的影響,，（84,，漂白粉）次氯酸鹽對病毒核酸有良好的降解作用，但揮發(fā)性強,，有效氯作用時間短,，檸檬酸，洗百健,，過氧乙酸,，戊二醛對核酸降解效果不明顯，衛(wèi)可主要成分是過硫酸氫鉀能產(chǎn)生生物殺滅劑高活性氧,，氧化因子和氯化鈉通過化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生氯化因子,，綜合具有氧化.氯化.酸化三合一功效，適用帶豬消毒,，浸泡。2%—8%燒堿消毒液,，PH>12（以上消毒液作用時間都不得少于30分鐘）能把溫度調(diào)到30度（陽性欄撥牙）滲透力更強,，因為病毒表面第一層脂質(zhì)層，注意：短時間不能酸性,，堿性消毒液交遞使用,，結(jié)果會環(huán)境pH值不達標失去核酸降解作用，如何把病毒阻斷在豬場門外或者第一時間沿著病毒傳播路線阻斷病毒傳播,，努力將病毒控制在點狀發(fā)病區(qū)域避免出現(xiàn)病毒蔓延后引發(fā)的生產(chǎn)停擺,，合理正確使用消毒藥或消毒方式才能起到安全，有效的作用,。
病理變化：生物安全豬場嚴禁剖檢（血污染很難凈化,，如要剖檢需提前選擇強有力的消毒劑和方式），節(jié)選幾點非瘟豬只死亡解剖概況：脾臟腫大,，是正常脾3—6倍,，顏色暗黑，脆,，抖二下就斷,。淋巴結(jié)增大，水腫,，出血,，皮下出血，肝充血和膽囊出血,，胃腸增大,，腎表面瘀點，肺葉有瘀點，心包積液,，氣管和支氣管有泡沫,。
非洲豬瘟臨床癥狀：高熱40.5—42℃，耳,，四肢,，腹背部皮膚有出血點，發(fā)紺,，嘔吐,，精神沉郁，不食,，少食,，腹瀉便秘，糞便帶血,，不愿站立,，步態(tài)僵直，呼吸困難,，濕咳,，妊娠母豬流產(chǎn)，死胎,，最急性突然死亡,，不表現(xiàn)為任何癥狀。
診斷方法：實驗室診斷,，病原學(xué)：病毒分離—血細胞吸附試驗,，直接免疫熒光法，普通PCR和熒光定量PCR,，雙抗體夾心ELISA測定ASFV,。
血清學(xué)：間接ELISA檢測ASF特異性抗體，阻斷ELISA檢測ASF特異性抗體,。
PCR是監(jiān)測急性或亞急性臨床感染豬只病毒血癥的基本診斷工具（1）非洲豬瘟發(fā)病急,，病程短，需快速確診,。（2）潛伏期和發(fā)病期以抗原檢測進行確診,。（3）病毒變異之后，毒力的變化不盡相同,，變異的毒株毒性有可能會表現(xiàn)變強,，但也可以表現(xiàn)為減弱，當(dāng)宿主與病毒處于平衡時,，豬只在臨床不表現(xiàn)任何癥狀,，而且抗原檢測顯示陰性，但血清有非瘟病毒，檢測抗體呈陽性,，因此,，在豬群凈化和引種時，抗體檢測有價值,。
實時熒光定量PCR：只有最敏感的PCR檢測方法才能在感染的最初幾天檢測到低的病毒載量并在慢性和亞臨床感染過程的豬只中診斷出弱散發(fā)性的病毒血癥,。（樣本中核酸含量越高，越早可被檢測到,，Ct值越小,，樣本中病原原始拷貝量越高），對于急性非洲豬瘟,，病毒檢測PCR最有用,，血清學(xué)診斷價值較低，因為大多數(shù)豬在抗體反應(yīng)前死亡,，在7—10天內(nèi),，ASFV是中等毒力或者弱毒力毒株之后，抗體檢測的作用凸顯,。
樣品注意要點：采樣一定注意生物安全,，抗凝血（活動物）切忽冷凍，血清短期4度保存,，長期一20℃以下冷凍保存,，淋巴結(jié),，脾臟,，扁桃體，肺臟,，肝臟,，腎臟，棉試子,，糞便,，仔豬尸體，流產(chǎn)胎兒短期4度保存,，長期需一70℃以下冷凍保存,，蜱—干燥保存。
血液,，淋巴結(jié)病毒含量較高,，鼻和肛糞便試子病毒水平較低，病毒散毒發(fā)生于臨床癥狀出現(xiàn)前二天,，口腔液,，咽喉試子作為早期診斷推薦樣品，血樣，組織樣推薦為確診樣品,，在高毒力非洲豬瘟病毒中,，在血液，脾和淋巴結(jié)中病毒滴度高,。
ASF疫苗：目前沒有ASF合法疫苗,。疫苗商品化，安全性是放在第一位,，其次才是有效性,，西班牙早年也出過ASF疫苗，由于出現(xiàn)負反應(yīng),，不安全停下來了,，豬只多數(shù)疫苗研發(fā)是用異緣動物傳代的，如：古典豬瘟疫苗是兔子傳代,，但ASFV只感染豬只,，異體建立不起傳代，也就沒有異種宿主近親病毒可借用,。
阻斷技術(shù)：ASFV感染豬而不感染別的動物,，很容易想象ASFV與豬之間一定存在一些特異性的相互識別系統(tǒng)，ASFV結(jié)構(gòu)當(dāng)中的免疫原性蛋白,，P72,，P53蛋白以及豬口鼻黏膜的受體兩部分組成，ASFⅤ這把鑰匙打開了豬身上的這把鎖,，自然就侵入機體,，打開了通道，在生物安全不能做到100%的情況下,，阻斷ASFⅤ從豬體外進入豬體內(nèi),，就是我們最后的一道屏障，技術(shù)運用ASFⅤ免疫原性蛋白與豬體受體兩者之間一把鑰匙與鎖的關(guān)系,，利用基因克隆和蛋白重組技術(shù)在乳酸桿菌特異性的表達出ASFⅤ結(jié)構(gòu)當(dāng)中,，這個免疫（原）性蛋白，P72,，P53蛋白,，就如同復(fù)制出大量優(yōu)先占位口鼻黏膜受體的這些假鑰匙，提前將鎖孔都堵上,，進而封閉口鼻黏膜受體位點,，病毒再來侵襲時，口鼻受體結(jié)合位被假鑰匙占據(jù)了,，ASFV攜帶這把真鑰匙就無法插進去,，就如同給豬點戴上口罩,，可以很大程度阻斷ASFv對豬只的感染，當(dāng)然,，如果該技術(shù)成熟,，一定能夠為我們防控非瘟再加上一道強有力的保障。
臨床診斷：對疑似豬只也有臨床經(jīng)驗豐富的管理員診斷與實驗室檢測相一至,，所有臨床方法都是為了快速剔除陽性豬,，減少污染的風(fēng)險。在疫病的早期階段或少數(shù)動物受到感染時,，可能很難實現(xiàn)臨床診斷,，因其癥狀容易與其它疾病的癥狀相混淆，臨床診斷通常是推測性的,，在實驗室確診前,，任何診斷都不具有結(jié)論性，因此提升實驗室的檢測能力也是防控ASFV的重要手段,。所以現(xiàn)階段加強生物安全如：洗消,，烘焙，隔離,，靜置,，干凈，關(guān)口,，采樣檢測,，環(huán)控管理，區(qū)域不同,，場區(qū)建設(shè)選址不同等各方面因素都和生物安全息息相關(guān),，如南方非瘟多發(fā)于夏季，因為梅雨季節(jié),，雨水和排污等因素,，防非明顯受氣候影響,。而北方非瘟病毒冬季可存活甚久,，導(dǎo)致了北方反而在冬季多發(fā)。養(yǎng)豬人應(yīng)該把生物安全意識貫穿于整個養(yǎng)豬生產(chǎn)過程中,，觀念,，操作科學(xué)與否直接影響行為的結(jié)果，關(guān)乎養(yǎng)豬效率,，關(guān)乎豬場存亡,，生物安全只有100分，沒有99分,，豬場如果發(fā)生一例非洲豬瘟,，生產(chǎn)就停擺,，撥牙，檢測,，潛伏期到安全期的靜默等待,，恢復(fù)到正常生產(chǎn)，連鎖反應(yīng)吃空餉的母豬增多,，保育,，育成豬只死淘率增加。所以生物安全是豬場穩(wěn)定生產(chǎn)的唯一出路,。
結(jié)束語：此文章只提到ASFV幾種蛋白表達,，省略多數(shù)ASFV蛋白曲線編碼，不作學(xué)術(shù)交流,，意愿提高豬場一線員工對非洲豬瘟的認知度,，為提高豬場生產(chǎn)成績提供一點幫助。
