當(dāng)前,，我國(guó)非洲豬瘟出現(xiàn)弱毒株感染情況，生豬感染弱毒株后,，水平傳播能力強(qiáng),、潛伏期長(zhǎng)、帶毒排毒水平低,，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)且無(wú)規(guī)律,，臨床呈現(xiàn)隱蔽性強(qiáng)、早期監(jiān)測(cè)難,，對(duì)母豬群體生產(chǎn)性能影響較大等特點(diǎn),。為指導(dǎo)養(yǎng)殖場(chǎng)及時(shí)發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟病毒弱毒株，提升防控能力,，制定本技術(shù)指南,。
一、提升臨床發(fā)現(xiàn)能力
非洲豬瘟病毒弱毒株感染臨床癥狀不典型,，個(gè)體差異大,。妊娠母豬表現(xiàn)反復(fù)發(fā)燒、厭食等癥狀,，部分母豬流產(chǎn),、高比例死胎、乳房結(jié)痂,，初生仔豬活力差,。育肥群體非應(yīng)激條件下，癥狀不明顯,，應(yīng)激情況下表現(xiàn)皮膚壞死斑,、關(guān)節(jié)和脾臟腫大、壞死等癥狀,。要強(qiáng)化技術(shù)培訓(xùn),，提高對(duì)弱毒株識(shí)別能力。養(yǎng)殖場(chǎng)人員應(yīng)每日開(kāi)展豬場(chǎng)場(chǎng)內(nèi)巡欄,，觀(guān)察豬群臨床情況,，一旦發(fā)現(xiàn)豬只出現(xiàn)可疑癥狀時(shí)，要第一時(shí)間采樣檢測(cè),。有條件的養(yǎng)殖場(chǎng)可使用紅外體溫監(jiān)測(cè)系統(tǒng)每天對(duì)所有豬只進(jìn)行體溫監(jiān)測(cè),，發(fā)現(xiàn)異常的，要及時(shí)采樣檢測(cè),。發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性和疑似病例要及時(shí)向當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)農(nóng)村（畜牧獸醫(yī)）部門(mén)報(bào)告,，并按要求規(guī)范處置。
二,、優(yōu)化監(jiān)測(cè)方案
要配合使用非洲豬瘟病毒核酸和抗體檢測(cè),，優(yōu)化監(jiān)測(cè)方案，確保監(jiān)測(cè)效果,。定期開(kāi)展場(chǎng)外環(huán)境檢測(cè),，每周對(duì)場(chǎng)內(nèi)門(mén)把手,、風(fēng)機(jī)、料槽等高風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)進(jìn)行病毒核酸檢測(cè),。定期抽樣監(jiān)測(cè)母豬群及育肥群的病毒抗體情況,，高風(fēng)險(xiǎn)期要考慮對(duì)母豬全群進(jìn)行病毒抗體監(jiān)測(cè)。母豬分娩后,，采集臍帶血,、胎衣或胎衣液等樣品以及母豬深咽部拭子聯(lián)合尾根血混樣，進(jìn)行病毒核酸檢測(cè),。臨床發(fā)現(xiàn)異常豬只,，要立即逐頭對(duì)母豬群進(jìn)行病毒核酸和抗體檢測(cè)；對(duì)育肥群開(kāi)展棉繩口腔液采樣,，進(jìn)行病毒核酸檢測(cè),。對(duì)于病死豬，在確保養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)生物安全的情況下,，采集淋巴結(jié),、肺臟等樣品及時(shí)檢測(cè)病毒核酸。此外,，豬群進(jìn)行常規(guī)疫苗接種,、轉(zhuǎn)群、去勢(shì)等生產(chǎn)操作后,，要抽樣檢測(cè)非洲豬瘟病毒核酸,。要避免過(guò)高頻次的全群普查，降低交叉污染或擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn),。
三、科學(xué)采樣檢測(cè)
采用深咽拭子聯(lián)合尾根血混樣,，或口鼻拭子聯(lián)合腹股溝淋巴結(jié)穿刺混樣的采樣方法,，可提高病原檢出率。對(duì)臨床異常豬,，要同時(shí)采集前腔靜脈血,、尾靜脈血或耳緣靜脈血，進(jìn)行病毒抗體檢測(cè),。采樣要使用聚丙烯材質(zhì)拭子,，避免使用頭部為棉花制品的拭子、含海藻酸鈣拭子以及木柄拭子,，防止棉花纖維對(duì)蛋白質(zhì)吸附影響病毒洗脫效果及抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì)影響檢測(cè)結(jié)果,。前腔靜脈采血時(shí)，要保證每一頭豬一個(gè)保定繩,，保定繩用后放入含有消毒水的桶中消毒,，避免交叉污染,。
樣品保存應(yīng)使用無(wú)菌、對(duì)核酸無(wú)吸附作用的螺旋蓋塑料管,。每個(gè)樣品管應(yīng)再套一個(gè)樣品袋防止樣品泄露和污染,。新采集的臨床樣品應(yīng)在2～8℃下保存，采集后2～4小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室,。用于核酸檢測(cè)的樣品應(yīng)當(dāng)盡快進(jìn)行檢測(cè),，能在24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)的樣品可置于4℃保存；24小時(shí)內(nèi)無(wú)法檢測(cè)的樣品應(yīng)置于-70℃或以下保存（如無(wú)-70℃保存條件,，則于-20℃冰箱暫存）,。
病原檢測(cè)方法：可采用非洲豬瘟病毒（P72/CD2v/MGF）、非洲豬瘟病毒（P72/EGFP/mCherry）,、非洲豬瘟病毒（P72/X64R/MGF360-14L）等三重?zé)晒釶CR方法檢測(cè)病毒核酸,。必要時(shí)，需要對(duì)部分病毒基因進(jìn)行序列測(cè)定,，如EP402R基因,。對(duì)非常見(jiàn)基因變異且臨床癥狀特殊病例，需進(jìn)行全基因組測(cè)序鑒別,?？贵w檢測(cè)方法：采用經(jīng)批準(zhǔn)的間接ELISA、阻斷ELISA等方法或膠體金試紙條,。
四,、確保檢測(cè)質(zhì)量
要強(qiáng)化檢測(cè)人員技術(shù)能力，定期開(kāi)展培訓(xùn)和考核,。要定期檢測(cè)PCR儀,、熒光定量PCR儀等設(shè)備運(yùn)行能力，及時(shí)維護(hù)保養(yǎng),。要定期參加實(shí)驗(yàn)室間能力比對(duì),，日常使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行檢測(cè)質(zhì)控。要規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作,，避免病毒污染,。對(duì)樣品接收及處理間、試劑準(zhǔn)備間,、核酸提取和擴(kuò)增間等區(qū)域以及門(mén)把手,、傳遞窗、試驗(yàn)臺(tái)等高風(fēng)險(xiǎn)位置應(yīng)定期采樣檢測(cè),。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,，立即清潔工作區(qū)，使用消毒液對(duì)桌面,、地面,、生物安全柜等進(jìn)行消毒,，對(duì)操作間進(jìn)行紫外線(xiàn)照射消毒，妥善儲(chǔ)存開(kāi)封試劑和耗材,。
五,、強(qiáng)化生物安全防護(hù)措施
落實(shí)好常態(tài)化防控措施可有效阻止非洲豬瘟病毒感染。針對(duì)弱毒株流行特點(diǎn),，要持續(xù)從人,、車(chē)、物,、豬等方面強(qiáng)化防控措施,。
（一）人員管理。人員在進(jìn)場(chǎng)前3天不得去養(yǎng)豬場(chǎng),、屠宰廠(chǎng)（場(chǎng)）,、無(wú)害化處理廠(chǎng)、動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品交易市場(chǎng)等生物安全高風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)所,。根據(jù)不同區(qū)域生物安全等級(jí)進(jìn)行人員管理,，人員遵循從生物安全風(fēng)險(xiǎn)低的區(qū)域向生物安全風(fēng)向高的區(qū)域流動(dòng)。
進(jìn)入辦公/生活區(qū)域人員,，要更換消毒過(guò)的衣服及鞋靴,，洗手消毒并有效淋浴后，方可進(jìn)場(chǎng),，淋浴時(shí)要尤其注意指甲清洗,。實(shí)踐表明，一次有效淋?。ㄊ褂勉逶÷逗拖窗l(fā)水,，且淋浴5分鐘以上）可以消除人員體表攜帶的病毒；隨身物品經(jīng)消毒后入場(chǎng),，嚴(yán)禁攜帶豬肉制品入場(chǎng),；未經(jīng)允許，禁止進(jìn)入生產(chǎn)區(qū),，進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)前，人員要在生產(chǎn)區(qū)淋浴間洗澡,，所攜帶物品須經(jīng)生產(chǎn)區(qū)物資消毒間消毒后,，方可帶入。
進(jìn)入豬舍的流程：人員按規(guī)定路線(xiàn)進(jìn)入各自工作區(qū)域,，禁止進(jìn)入未被授權(quán)的工作區(qū)域,。每棟豬舍入口處都應(yīng)放置消毒盆（桶）、洗手消毒盆,。進(jìn)出豬舍要洗手,，清洗,、消毒工作靴（先刷洗鞋底鞋面污物，然后在腳踏消毒盆浸泡消毒）,。人員離開(kāi)生產(chǎn)區(qū)時(shí),，要將工作服放置在含有消毒劑的桶中浸泡消毒，且同樣需要按要求洗澡,，防止把病毒帶出,。嚴(yán)禁飼養(yǎng)人員串豬舍。
（二）車(chē)輛管理,。外來(lái)車(chē)輛或者去過(guò)高風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)所的本場(chǎng)車(chē)輛,，未經(jīng)徹底清洗消毒進(jìn)入養(yǎng)殖場(chǎng)，是病毒傳入的重要途徑,。車(chē)輛要經(jīng)過(guò)徹底清洗,、消毒和烘干后使用（流程包括：高壓沖洗，確保無(wú)表面污物,；清潔劑處理有機(jī)物,；消毒劑噴灑消毒；充分烘干）,。要盡量選擇場(chǎng)外作業(yè),，減少車(chē)輛入場(chǎng)。
外來(lái)運(yùn)豬車(chē)管理：外來(lái)運(yùn)豬車(chē),，必須選擇在農(nóng)業(yè)農(nóng)村（畜牧獸醫(yī)）部門(mén)登記備案車(chē)輛,，清洗、消毒及烘干后,，方可接近豬場(chǎng)出豬臺(tái)或中轉(zhuǎn)站（臺(tái)）,。隨后對(duì)車(chē)輛所經(jīng)道路進(jìn)行徹底消毒。
飼料運(yùn)送車(chē)管理：飼料運(yùn)送車(chē)應(yīng)停放在場(chǎng)區(qū)外安全距離,，對(duì)車(chē)體和車(chē)輪進(jìn)行消毒,；卸下飼料后，由場(chǎng)內(nèi)人員對(duì)飼料外包裝表面消毒,。建議設(shè)置中轉(zhuǎn)料塔,、場(chǎng)內(nèi)飼料運(yùn)輸車(chē)，飼料從場(chǎng)外直接輸送到中轉(zhuǎn)料塔,，運(yùn)輸車(chē)輛不必進(jìn)入豬場(chǎng)內(nèi),。
內(nèi)部運(yùn)豬車(chē)管理：選擇場(chǎng)內(nèi)空間相對(duì)獨(dú)立的地點(diǎn)進(jìn)行車(chē)輛洗消和停放。運(yùn)豬車(chē)使用完畢后要立即到指定地點(diǎn)清洗,、消毒及烘干,。
死豬/豬糞運(yùn)輸車(chē)管理：死豬/豬糞運(yùn)輸車(chē)專(zhuān)場(chǎng)專(zhuān)用。轉(zhuǎn)運(yùn)死豬/豬糞時(shí)，避免與外部車(chē)輛接觸,，運(yùn)輸至死豬或豬糞暫存點(diǎn),，暫存點(diǎn)距離場(chǎng)區(qū)要大于100-200米。轉(zhuǎn)運(yùn)后,，車(chē)輛及時(shí)清洗,、消毒及干燥，并消毒車(chē)輛所經(jīng)道路,。
私家車(chē)管理：私家車(chē)禁止進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)和生活區(qū),，宜在距離場(chǎng)區(qū)外100米以上位置停放。
（三）物資管理,。獸藥疫苗,、飼料等生產(chǎn)物資，以及食材等生活物資,，是豬場(chǎng)重點(diǎn)管理的風(fēng)險(xiǎn)物資,。豬場(chǎng)要制定物資進(jìn)場(chǎng)計(jì)劃，盡可能減少入場(chǎng)頻次,，并保證每批次進(jìn)場(chǎng)物資的消毒效果,。
入場(chǎng)獸藥疫苗管理：嚴(yán)格執(zhí)行進(jìn)場(chǎng)消毒，疫苗及有溫度要求的藥品,，拆掉外層包裝,，使用消毒劑浸泡消毒后再轉(zhuǎn)入儲(chǔ)存或立即使用。其他常規(guī)藥品,，拆掉外層包裝,，經(jīng)烘干、或熏蒸消毒,，轉(zhuǎn)入儲(chǔ)存或立即使用,。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)或規(guī)程儲(chǔ)存、使用疫苗及藥品,，疫苗瓶和注射器等醫(yī)療廢棄物應(yīng)及時(shí)進(jìn)行無(wú)害化處理,。豬舍內(nèi)部使用后的疫苗瓶等廢棄物，要在舍內(nèi)使用密閉袋密封,，消毒劑浸泡消毒后帶出,。
飼料管理：禁止從疫區(qū)購(gòu)買(mǎi)玉米等飼料原料，確保飼料無(wú)病原污染,。了解購(gòu)進(jìn)的全價(jià)飼料是否含有動(dòng)物源性飼料添加劑,，避免飼料中添加動(dòng)物源性飼料添加劑。飼料經(jīng)充分干燥或加熱熟化后使用,，所有飼料包裝袋均充分熏蒸消毒,。
入場(chǎng)食材管理：在入場(chǎng)食材的選取上，要求食材生產(chǎn),、流通情況清晰,、可控，無(wú)病原污染,；禁止生鮮豬肉及制品入場(chǎng),；蔬菜和瓜果類(lèi)食材無(wú)泥土、無(wú)爛葉,，禽類(lèi)和魚(yú)類(lèi)食材無(wú)血水,，經(jīng)食品消毒處理后入場(chǎng)。進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)的飯菜,，應(yīng)由豬場(chǎng)廚房提供熟食,，禁止生鮮食材進(jìn)入；飯菜容器經(jīng)消毒后進(jìn)入,。
（四）豬群管理,。要優(yōu)化管理制度，在引種,、轉(zhuǎn)運(yùn),、出售等高風(fēng)險(xiǎn)生產(chǎn)環(huán)節(jié)中做好全程防控管理。
避免場(chǎng)外散養(yǎng)或放養(yǎng)：避免場(chǎng)外散養(yǎng)和放養(yǎng)模式,，防止家豬與野豬接觸及采食丟棄的垃圾食物,。
宜實(shí)施“全進(jìn)全出”管理制度：“全進(jìn)全出”模式是豬場(chǎng)飼養(yǎng)管理、減少疫病循環(huán)傳播的有效措施,，養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)應(yīng)盡可能采取“全進(jìn)全出”的飼養(yǎng)模式,。
引進(jìn)豬只管理：嚴(yán)格執(zhí)行引種檢測(cè)、隔離,，堅(jiān)持自繁自養(yǎng),。引種前需經(jīng)過(guò)非洲豬瘟等重大動(dòng)物疫病檢測(cè)，抗原,、抗體確認(rèn)陰性,，在場(chǎng)外或場(chǎng)內(nèi)特定區(qū)域?qū)嵤└綦x觀(guān)察，確認(rèn)安全后方可入場(chǎng),。對(duì)僅飼養(yǎng)育肥豬的豬場(chǎng),，全部空欄消毒后再購(gòu)入仔豬，要注意觀(guān)察入場(chǎng)后健康情況,。
豬只轉(zhuǎn)運(yùn)管理：豬只轉(zhuǎn)運(yùn)一般包括斷奶仔豬轉(zhuǎn)運(yùn),、淘汰豬轉(zhuǎn)運(yùn)、育肥豬出欄轉(zhuǎn)運(yùn)以及后備豬轉(zhuǎn)運(yùn),。根據(jù)是否自有和可控,，將運(yùn)輸車(chē)輛分為兩類(lèi)：自有可控車(chē)輛可在豬場(chǎng)進(jìn)行豬只轉(zhuǎn)運(yùn),。
售豬管理：禁止銷(xiāo)售病死豬，禁止生豬販運(yùn),、承運(yùn)等外來(lái)人員,，以及外來(lái)拉豬車(chē)輛進(jìn)入養(yǎng)殖場(chǎng)。避免內(nèi)外人員交叉,。豬場(chǎng)趕豬人員嚴(yán)禁接觸出豬間（臺(tái)）靠近場(chǎng)外生豬車(chē)輛的一側(cè),，外來(lái)人員禁止接觸出豬間（臺(tái)）靠近場(chǎng)內(nèi)一側(cè)。售豬前,、后,，要及時(shí)對(duì)出豬間（臺(tái)）、停車(chē)處,、趕豬通道和裝豬區(qū)域進(jìn)行全面清洗消毒,。出豬間(臺(tái))及附近區(qū)域、趕豬通道應(yīng)硬化,，方便沖洗,、消毒，做好防鼠,、防雨水倒流,。
