(1)供試菌株的分離鑒定與培養(yǎng)。從豐寧縣樂(lè)拓牧業(yè)公司羊場(chǎng)因腹瀉死亡的羔羊中取1只進(jìn)行試驗(yàn)研究,,取肝臟做細(xì)菌分離,,接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板,,37℃培養(yǎng)24小時(shí),挑取表面光滑,、邊緣整齊,、灰白色、半透明的小菌落,, 接種于麥康凱瓊脂平板,,37℃培養(yǎng)24小時(shí), 再?gòu)柠溈祫P瓊脂平板上挑取孤立的紅色菌落,。將分離的單個(gè)菌落涂片革蘭氏染色,、鏡檢,觀察到兩端鈍圓的小桿菌,,單個(gè)或成對(duì)排列,,革蘭氏染色陰性。將分離的菌株進(jìn)行生化試驗(yàn),。結(jié)果見(jiàn)表1,。

注:⊕發(fā)酵糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣;+發(fā)酵糖產(chǎn)酸或?qū)嶒?yàn)陽(yáng)性,;-不發(fā)酵糖或?qū)嶒?yàn)陰性,;⊕/ⅹ遲緩發(fā)酵糖類(lèi)。由表1可知,,所分離的5個(gè)菌株均為羊的大腸桿菌,。將分離鑒定后確定為大腸桿菌的菌落無(wú)菌接種在營(yíng)養(yǎng)肉湯中37℃培養(yǎng)24小時(shí),用滅菌生理鹽水稀釋10倍,,備用,。
(2)藥敏紙片。用6mm打孔器打出濾紙小圓片,,160℃干熱滅菌1小時(shí)后按常規(guī)方法分別制備青霉素,、鏈霉素、慶大霉素,、環(huán)丙沙星和氟本尼考等藥敏紙片,,備用。
(3)中藥,。從本地醫(yī)藥公司采購(gòu)白頭翁,、蒼術(shù)、白術(shù),、黃芪,、茯苓、澤瀉、大青葉,、苦參,、青皮和陳皮。
2 試驗(yàn)方法
(1)制備藥液,。將上述中藥加適量水煎煮30分鐘后過(guò)濾,,水煎2次,將2次過(guò)濾的藥液合并濃縮成含生藥1g/mL的藥液備用,。
(2)中藥藥敏試驗(yàn),。采用平皿打洞法將供試藥液均勻涂布在瓊脂培養(yǎng)基表面,用直徑6mm打孔器在瓊脂平板上打孔(適當(dāng)封閉孔底),,將制備好的中藥供試液分別加入各孔內(nèi)(滿(mǎn)而不溢),,貼上標(biāo)記,置37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí),。
(3)抗菌藥敏試驗(yàn),。將供試菌液均勻涂布于瓊脂培養(yǎng)基表面貼上標(biāo)記,以無(wú)菌方法貼上各種藥敏實(shí)驗(yàn)紙,,置37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí),。
(4)抑菌結(jié)果的判定。抑菌圈大于15mm以上為高度敏感,,10~15mm為中度敏感,,小于10mm為低度敏感,沒(méi)有抑菌圈為無(wú)效,。
3 試驗(yàn)結(jié)果
白頭翁對(duì)菌株呈高度敏感,,黃芪呈中度敏感,其他中藥均呈低度敏感,,苦參,、大青葉對(duì)個(gè)別菌株無(wú)抑菌效果;慶大霉素,、環(huán)丙沙星呈高度敏感,,恩諾沙星中度敏感,氟苯尼考,、磺胺嘧啶呈低度敏感,,青霉素基本沒(méi)有抑菌作用。常用的抗生素對(duì)不同菌株間的抑菌效果具有一定的差異性,,這種菌株差異比中藥明顯,,說(shuō)明在解決臨床耐藥菌株方面,中藥具有更好的效果,,但是中草藥的敏感程度不如常用的抗生素藥物,需要進(jìn)一步探討和研究?jī)烧唛g如何合理有效地配合問(wèn)題,。
(河北省豐寧滿(mǎn)族自治縣農(nóng)牧局 李海燕,、劉國(guó)文,、葉和平)