摘要：2015年10月,，某規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生了一起肉雞的傳染性,、快速死亡病例，發(fā)病雞表現(xiàn)出呼吸困難,、下痢,、病死率和死亡率較高、漿膜和黏膜出血等臨床特征,，從臨床診斷疑似為新城疫病毒感染,，無(wú)菌取病料送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行PCR檢測(cè)和病毒分離鑒定等進(jìn)行確診，結(jié)合臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果,，最終確診該養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生了新城疫病毒的感染,。

    雞新城疫毒病是由雞新城疫病毒引起的一種高度接觸性、急性,、烈性傳染病,。該病感染的宿主范圍比較廣，雞,、鴨,、鵝、火雞,、鵪鶉和鴿子等均易感,。病雞和帶毒雞是NDV的主要傳染源，可經(jīng)呼吸道和消化道傳播,，一年四季都可發(fā)生,，但以春秋季發(fā)病較多,。該病傳播速度快、發(fā)病率和死亡率高,，是目前危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)最為嚴(yán)重的烈性傳染病之一和我國(guó)長(zhǎng)期以來(lái)一直堅(jiān)持免疫的主要傳染病之一,。2015年10月，某規(guī)模肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生了一起以呼吸困難,、下痢,、病死率和死亡率較高以及漿膜和黏膜出血為主要特征的傳染病，經(jīng)臨床診斷,、實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)和病毒分離鑒定,，最終確診為由新城疫病毒感染所致。現(xiàn)將整個(gè)診斷過(guò)程介紹如下,。

    1  材料和方法

   （1）主要試劑,。一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑盒、DL2000 DNA Marker均購(gòu)自寶生物（大連）工程有限公司,，抗新城疫病毒陽(yáng)性血清購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,。

   （2）實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)。將無(wú)菌采取病死雞的肝臟,、脾臟和淋巴結(jié)等組織病料加滅菌生理鹽水研磨,，反復(fù)凍融3次，12000r/分鐘離心5分鐘,，取上清液參照參考文獻(xiàn)[5]中的方法提取基因組RNA,，并按照其RT-PCR擴(kuò)增條件分別進(jìn)行新城疫強(qiáng)毒和弱毒的RT-PCR檢測(cè)。

   （3）SPF雞胚病毒分離,。將上述處理的病毒上清液加入青霉素和鏈霉素,，4℃作用6小時(shí)以上，之后將處理的樣品接種10日齡SPF雞胚,，0.1mL/胚,，置37℃孵化器內(nèi)培養(yǎng)120小時(shí)，24小時(shí)內(nèi)死亡的雞胚棄去,，24～120小時(shí)死亡的雞胚4℃保存,。

   （4）雞胚病變觀察。120小時(shí)后收獲所有雞胚尿囊液,，觀察接種雞胚的胚體病變情況,。

   （5）血凝試驗(yàn)。取收獲的雞胚尿囊液做血凝試驗(yàn)（HA）,。

   （6）病毒中和試驗(yàn)。 取收獲的雞胚尿囊液與等量

    抗雞新城疫病毒特異性血清混合,，室溫中和1小時(shí)后,，接種SPF雞胚10只,，觀察120小時(shí)，觀察雞胚的胚體病變情況,，收獲雞胚尿囊液做血凝試驗(yàn),。

    2  結(jié)果與分析

   （1）臨床癥狀及剖檢變化。發(fā)病雞精神萎靡,，眼半閉半睜,，食欲下降，咳嗽,，呼吸困難,，有粘性鼻液，張口呼吸,，病程短,，2～5天死亡。剖檢可見(jiàn)全身黏膜出血,，淋巴結(jié)腫大,、出血，腺胃黏膜出血,、壞死,，盲腸扁桃體腫大、出血,。

   （3）RT-PCR 檢測(cè)結(jié)果,。組織病料經(jīng)新城疫強(qiáng)毒擴(kuò)增引物可擴(kuò)增出349bp 的特異性條帶，與明文龍等的報(bào)道完全一致,。而組織病料經(jīng)新城疫弱毒擴(kuò)增引物未擴(kuò)增出任何特異性條帶,。表明組織病料中含有新城疫強(qiáng)毒，而沒(méi)有新城疫弱毒,。

   （4）胚體病變觀察結(jié)果,。接種后72～12 小時(shí)，接種的雞胚陸續(xù)出現(xiàn)死亡,，剖檢觀察死亡雞胚可見(jiàn)胚體全身出血,，頭部、足趾和翅膀出血嚴(yán)重,。

   （5）血凝試驗(yàn)（HA）結(jié)果,。收獲的尿囊液對(duì)1%雞紅細(xì)胞的血凝效價(jià)為1∶1024。

   （6）病毒中和試驗(yàn)結(jié)果,。雞胚尿囊液與抗雞新城疫病毒陽(yáng)性血清中和后接種的雞胚至接種后120小時(shí),，10枚雞胚全部健活，剖檢雞胚未見(jiàn)病變,。收獲其尿囊液做血凝試驗(yàn),，對(duì)1%雞紅細(xì)胞無(wú)凝集性,，表明分離毒株可被抗雞新城疫病毒陽(yáng)性血清特異性中和。

   （7）綜合診斷結(jié)果,。結(jié)合臨床癥狀,、剖檢病理變化等臨床診斷結(jié)果以及RT-PCR檢測(cè)、病毒分離,、胚體病變觀察,、分離毒株血凝試驗(yàn)、分離毒株中和試驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果,，確診為此次疫病由新城疫病毒感染所致,。

    3  討論

    新城疫病毒不僅對(duì)養(yǎng)禽業(yè)危害嚴(yán)重，也是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)健康發(fā)展的重要疾病之一,，能夠造成很大的經(jīng)濟(jì)損失,。新城疫病毒的宿主范圍廣泛，由于野生飛禽的存在,，病毒很難凈化,，預(yù)防該病主要通過(guò)疫苗免疫接種和加強(qiáng)飼養(yǎng)場(chǎng)的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生，經(jīng)常消毒,。新城疫病毒一旦在養(yǎng)殖場(chǎng)存在就很難根除,，在雞群中長(zhǎng)期存在，當(dāng)雞群免疫力下降時(shí)會(huì)引發(fā)疾病,。疫苗免疫雞群也可以發(fā)生新城疫,，常由于疫苗接種時(shí)受母源抗體的影響，接種疫苗后不能獲得免疫力,，當(dāng)雞群中存在新城疫強(qiáng)毒時(shí)導(dǎo)致雞群發(fā)病,。

   （龐國(guó)峰  山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局）