豬偽狂犬病根據(jù)疾病的臨診癥狀，結(jié)合流行病學(xué)可做出初步診斷,，確診必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查,。同時要注意與豬細(xì)小病毒、流行性乙型腦炎病毒,、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒,、弓形蟲及布魯氏菌等引起的母豬繁殖障礙相區(qū)別,。

    1  病毒的分離鑒定

    病毒的分離是診斷偽狂犬病的可靠方法,。患病動物的多種病料組織如腦,、心,、肝、脾,、肺,、腎和扁桃體等均可用于病毒的分離，但以腦組織和扁桃體最為理想,。病料經(jīng)處理后可直接接種敏感細(xì)胞,，如豬腎傳代細(xì)胞(PK-15和IBRS-2)、倉鼠腎傳代細(xì)胞(BHK-21)或雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)在接種后24~72小時內(nèi)可出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變,。若初次接種無細(xì)胞病變,，可盲傳3代。不具備細(xì)胞培養(yǎng)條件時,，可將處理的病料接種家兔或小鼠,，根據(jù)家兔或小鼠的臨診表現(xiàn)做出判定，但小鼠不如家兔敏感,。分離到病毒后再用標(biāo)準(zhǔn)陽性血清做中和試驗(yàn)以確診該病,。

    2  組織切片熒光抗體檢測

    取患病動物的病料如腦或扁桃體的壓片或冰凍切片，用直接免疫熒光檢查,。其優(yōu)點(diǎn)是快速,，幾小時內(nèi)即可獲得可靠結(jié)果。新生仔豬的敏感性與病毒分離相當(dāng),，而育肥豬與成年豬,，該方法不如病毒分離敏感。

    3  PCR檢測豬偽狂犬病病毒

    利用PCR可從患病動物的分泌物,，如鼻咽拭子或組織病料中擴(kuò)增豬偽狂犬病病毒的基因,，從而對患病動物進(jìn)行確診。PCR與病毒分離鑒定相比,，具有快速,、敏感和特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，能同時檢測大批量的樣品,，并且能夠進(jìn)行活體檢測,，適合于臨診診斷。

    4  血清學(xué)診斷

    多種血清學(xué)方法用于偽狂犬病的診斷,，應(yīng)用最廣泛的有中和試驗(yàn),、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn),、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)及間接免疫熒光等,。其中血清中和試驗(yàn)的特異性和敏感性都是最好的,，并且被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為法定的診斷方法。但是由于中和試驗(yàn)對技術(shù)條件要求高,、時間長,，所以主要用于實(shí)驗(yàn)室研究。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)同樣具有特異性強(qiáng)和敏感性高的特點(diǎn),，3~4小時內(nèi)可得出試驗(yàn)結(jié)果,，并可同時檢測大批量樣品，廣泛用于偽狂犬病的臨診診斷,。另外,，近幾年來乳膠凝集試驗(yàn)以其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)在臨診上廣泛應(yīng)用。該方法操作簡便,，幾分鐘之內(nèi)便可得出試驗(yàn)結(jié)果,。

    5  鑒別診斷

    豬偽狂犬病病毒鑒別診斷方法，是在使用基因標(biāo)志疫苗的基礎(chǔ)上應(yīng)用的一類診斷方法,。由于PRV中存在多個非必需糖蛋白基因,，缺失這些基因的病毒突變株不能產(chǎn)生被缺失基因所編碼的糖蛋白，但又不影響病毒在細(xì)胞上的增殖與免疫原性,。將這種基因缺失標(biāo)志疫苗注射動物后,，動物不能產(chǎn)生針對缺失蛋白的抗體，因此可通過血清學(xué)方法將自然感染野毒的血清學(xué)陽性豬與注苗豬區(qū)分開來,。目前,，缺失疫苗缺失的糖蛋白基因主要為gE和gG基因，也有缺失gC和gB基因的,。針對缺失的糖蛋白已利用大腸桿菌或酵母等表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)產(chǎn)物建立了相應(yīng)的鑒別診斷方法,，如gE-ELISA、gG-ELISA,、gC-ELISA,、gB-ELISA以及gE-LAT、gG,、LAT等,，實(shí)驗(yàn)證實(shí)這些方法的特異性強(qiáng)、敏感性高,，可用于臨診檢測,，同時乳膠凝集還具有簡單和快速的特點(diǎn)。目前,，在我國已有g(shù)E-ELISA,、gGELISA和gE-LAT、gG-LAT問世,。

   （王阜生 遼寧省阜蒙縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所）