摘要：目的：研究新生豬源沙門氏菌耐藥性及耐藥基因,。方法：選用改良肉湯半固體培養(yǎng)基,、XL74培養(yǎng)基，從150份新生豬源豬肉標(biāo)本中初篩可疑沙門氏菌,，以PCR鑒定沙門氏菌,。以K-B法測定新生豬源沙門氏菌的耐藥性，并采用PCR擴增技術(shù)檢測耐藥基因,。結(jié)果：共鑒定出21株新生豬源沙門氏菌,，對氯霉素和慶大霉素的敏感性較高，對環(huán)丙沙星和鏈霉素表現(xiàn)為高耐藥,，耐藥基因共5種,。結(jié)論：新生豬源沙門氏菌耐藥現(xiàn)象較為嚴(yán)重。
1 材料與方法
（1）材料,。菌株來源：2017年6月~2017年10月抽取某養(yǎng)殖場150份新生豬豬肉樣品,；藥敏質(zhì)控菌沙門氏菌C79-13及陽性對照菌株。試劑：PCR試劑（北京百泰生物技術(shù)有限公司）,，實驗所需引物系自主合成,，藥敏紙片（北京蘭博瑞生物技術(shù)有限公司），具體包含慶大霉素,、復(fù)方新諾明,、鏈霉素、環(huán)丙沙星,、氯霉素,、壯觀霉素、四環(huán)素,、諾氟沙星,、阿米卡星以及萘啶酸共10種。儀器：DYY-70型號電泳儀,、TGL-16G臺式離心機,、DHP-9048型號恒溫培養(yǎng)箱等。
（2）方法,。將采集的150份新生豬豬肉樣本逐一置于滅菌袋內(nèi),，加入培養(yǎng)基共同保存。新生豬豬肉樣本保存時間不得超出12小時,。
細(xì)菌分離方法,。將樣本置于含BPW培養(yǎng)液的無菌密封袋內(nèi)保存，于37℃條件下?lián)u床過夜,。第二天,，吸取1mLBPW前增菌液至改良肉湯半固體培養(yǎng)基表面，置于42℃恒溫箱內(nèi)持續(xù)培養(yǎng)24小時,。培養(yǎng)后從培養(yǎng)基中挑取白色可疑菌落,，采用三區(qū)劃線法進行處理，于37℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)24小時,。采用PCR鑒定法鑒定疑似沙門氏菌,，以Stn的核苷酸序列設(shè)引物。
PCR反應(yīng)條件為：94℃5min預(yù)變性處理,，保持溫度不變,，預(yù)變性45s后轉(zhuǎn)為55℃條件，持續(xù)退火45s；調(diào)整至72℃延伸30s,，經(jīng)過30個循環(huán),。最后于72℃條件下持續(xù)延伸10min。電泳方法選用瓊脂糖凝膠,，電泳后回收DNA膠,，所得產(chǎn)物用于DNA測序。標(biāo)本血清型鑒定選用玻片凝集法,，新生豬源沙門氏菌的藥敏試驗采用K-B法進行,。
2 結(jié)果
（1）新生豬源沙門氏菌鑒定結(jié)果。本組150份新生豬豬肉樣本經(jīng)改良肉湯半固體培養(yǎng)基,、XL74培養(yǎng)基兩輪篩選后,，分離出24株可疑沙門氏菌（表面可見黑色中心，而且周圍可見透明暈環(huán)菌落）,。經(jīng)PCR鑒定（Stn基因）及電泳產(chǎn)物回收測序后,，確定21株沙門氏菌。新生豬源沙門氏菌的分離率為14.00%,。
（2）新生豬源沙門氏菌的血清型鑒定結(jié)果,。21株新生豬源沙門氏菌中，共鑒定出6種血清型,，其中腸炎沙門氏菌分離率最高,，占比25.14%，其他優(yōu)勢血清型包含徳爾卑血清型（21.25%）和里森沙門菌（13.62%）,。
（3）新生豬源沙門氏菌的耐藥性,。21株新生豬源沙門氏菌的10種抗生素藥敏分析結(jié)果顯示，分離菌對10種抗菌藥物的耐藥性各不相同：新生豬源沙門氏菌對氯霉素（72.45%）,、慶大霉素（68.26%）和壯觀霉素（65.28%）的敏感性較高,，而對環(huán)丙沙星（98.75%）、鏈霉素（94.23%）和阿米卡星（87.69%）表現(xiàn)為高耐藥,。其中,，3株新生豬源沙門氏菌僅耐1種藥物，而18株新生源沙門氏菌耐2種以上抗生素,。
（4）新生豬源沙門氏菌的耐藥基因,。本組10種耐藥基因中，有5種經(jīng)PCR擴增出相應(yīng)大小的目的片段,。其中,，磺胺類耐藥基因包含sulII和sulI兩種，后者檢出率最高,，為45.62%,；喹諾酮類耐藥基因以parC為主，檢出率為97.46%；氯霉素耐藥基因floR為47.26%,。
3 討論
沙門氏菌抗原性復(fù)雜,，耐藥性強，沙門氏菌感染為豬安全養(yǎng)殖及食物污染控制帶來諸多不便,。為了評估新生豬源沙門氏菌的耐藥性及耐藥基因,，本研究將150份新生豬豬肉標(biāo)本作為研究對象，結(jié)果表明：150份豬肉樣本中共分離出21株沙門氏菌,，分離率為14.00%。新生豬源沙門氏菌對不同抗生素的耐藥程度各不相同,，其中高耐藥主要包含環(huán)丙沙星（98.75%）,、鏈霉素（94.23%）和阿米卡星（87.69%），而3株新生豬源沙門氏菌僅耐1種藥物,，其余18株新生源沙門氏菌耐2種以上抗生素,。這一結(jié)果表明新生豬源沙門氏菌的耐藥現(xiàn)象較為明顯。
PCR結(jié)果顯示：磺胺類耐藥基因sulII,、sulI（45.62%）,，喹諾酮類耐藥基因parC（97.46%），氯霉素floR（47.26%）,。通過對耐藥性及耐藥基因的對比發(fā)現(xiàn),，新生豬源沙門氏菌的耐藥性與耐藥基因存在密切關(guān)聯(lián)。
4 結(jié)論
綜上所述,，新生豬源沙門氏菌耐藥現(xiàn)象較為明顯,，而且對環(huán)丙沙星、鏈霉素及阿米卡星的耐藥性較高,。因此,，對新生豬的沙門氏菌感染治療中應(yīng)慎用上述抗生素。此外,，養(yǎng)殖場應(yīng)加強沙門氏菌的感染預(yù)防,，一旦發(fā)生感染，應(yīng)遵循交叉用藥原則,，避免因抗生素濫用導(dǎo)致沙門氏菌耐藥率持續(xù)增長,。
（孫代鵬、張寶珠,、韓芮,、劉福星、郭文潔 沈陽工學(xué)院生命工程學(xué)院）
