摘要：目的：進(jìn)行藥敏紙片法和打孔法檢測細(xì)菌耐藥性的方法比較。方法：將青霉素,、鏈霉素,、硫酸慶大霉素配成濃度為100單位/mL時(shí)，通過藥敏紙片法和打孔法,，測定其抑菌圈直徑來進(jìn)行比較兩種方法對細(xì)菌的耐藥性,。結(jié)果：在100單位/mL的藥液濃度時(shí),，抑菌效果打孔法優(yōu)于藥敏紙片法,。結(jié)論：在同一濃度時(shí)打孔法的抑菌效果優(yōu)于紙片法,。

    藥敏紙片法是最常用的一種試驗(yàn)方法，能直接體現(xiàn)出抗菌藥物的抗菌效用,。其優(yōu)點(diǎn)是直觀明顯,、對比鮮明，有一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù),。打孔法僅用1個(gè)打孔器,，省去了數(shù)量較多的紙片和藥物的浪費(fèi)。由于液體的表面張力作用,，孔中液體在較低斜度下不會外流,，能獲得理想的圓形抑菌圈。

    1  材料與方法

   （1）材料,。藥物為青霉素,、鏈霉素和硫酸慶大霉素，購自華北制藥股份有限公司,。菌種為大腸桿菌,、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌和產(chǎn)氣桿菌,，由安徽科技學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存,。培養(yǎng)基和試劑為普通營養(yǎng)瓊脂、蒸餾水,、磷酸二氫鉀和生理鹽水,。儀器為恒溫水浴培養(yǎng)箱、超凈工作臺和高壓蒸汽滅菌器,。

   （2）方法,。藥物配制參照《抗生素藥品檢驗(yàn)》的配制方法。培養(yǎng)基制備,。在容量為1000mL的三角燒瓶中加入蒸餾水1000mL,，放在電爐上加熱。用天平準(zhǔn)確稱取35.0g營養(yǎng)瓊脂,，放入三角燒瓶中并不斷攪拌使瓊脂完全溶解,，然后放入高壓滅菌鍋中經(jīng)（121℃，20分鐘）高壓滅菌,，取出趁熱倒入經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)皿中,，厚度約3～5mm，冷卻凝固后備用,。菌種活化,。將4種菌種分別接種至普通營養(yǎng)瓊脂斜面后,，置37℃下培養(yǎng)箱中過夜備用。

    濾紙片的制備及處理,。將普通定性濾紙用打孔機(jī)打成若干圓形紙片，直徑為5.0mm,，置于干燥潔凈的試管內(nèi),，塞上棉塞，放入高壓滅菌鍋中經(jīng)(121℃,，20分鐘)高壓滅菌后,，取出放入恒溫干燥箱內(nèi)進(jìn)行干燥。取一定數(shù)量紙片,，分別放入100單位/mL 的各種藥物中,，浸潤后備用。接種培養(yǎng),。分別取上述菌株的新鮮培養(yǎng)物,，在無菌操作條件下，用不同涂布棒均勻涂抹在接種過不同菌種的瓊脂培養(yǎng)基上,，再用無菌鑷子,，將在藥液中浸潤的紙片均勻間隔貼于各培養(yǎng)基表面，再用無菌吸管在接種過不同菌種的培養(yǎng)基上打孔,，將藥液用移液槍移入孔內(nèi),，各藥液對每種試驗(yàn)菌均做3個(gè)重復(fù)。貼入時(shí)標(biāo)記起始位置,，按順時(shí)針或逆時(shí)針方向?qū)V紙片順序貼入,，輕壓紙片使接觸良好。放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中,，24小時(shí)后取出,，觀察抑菌圈，測量并記錄結(jié)果,，取抑菌圈直徑平均值,。抑菌圈直徑測量參照《微生物和檢驗(yàn)技術(shù)》判定結(jié)果，用抑菌圈的直徑表示,，抑菌圈越大,，抑菌效果越好。

    2  結(jié)果與分析

   （1）抑菌圈直徑測量,。濃度為100單位/mL的藥物紙片貼于4種細(xì)菌培養(yǎng)物上和培養(yǎng)24小時(shí)后,，用直尺測量抑菌圈的直徑，取平均值,。再將濃度為100單位/mL的藥液用移液槍移入四種細(xì)菌培養(yǎng)物上,，用直尺測量抑菌圈的直徑,，取平均值。
    由表1和表2可見,，藥敏紙片法和打孔法抑菌的總體效果是青霉素對細(xì)菌的抑菌結(jié)果中,，藥敏法對金黃色葡萄球菌的抑制>對產(chǎn)氣桿菌的抑制>對枯草桿菌的抑制>對大腸桿菌的抑制，而打孔法無抑菌效果,。鏈霉素和硫酸慶大霉素對各種細(xì)菌的抑菌結(jié)果中,，打孔法的效果優(yōu)于藥敏紙片法。

    3  結(jié)論

    在同一藥液濃度的條件下,，打孔法的抑菌效果優(yōu)于藥敏紙片法,。

   （謝秀麗  安徽省池州市貴池區(qū)畜牧獸醫(yī)局；蔣月美  安徽省池州市貴池區(qū)唐田鎮(zhèn)人民政府）