1 精液品質(zhì)檢查
(1)采精量。采集精液后稱重,,按每克1mL計(jì),,避免以量筒等測(cè)量精液的體積。
(2)顏色,。正常的精液是乳白色或淺灰色,,精子密度越高,色澤愈濃,,透明度愈低,。帶有綠色、黃色,、淺紅色,、紅褐色等異常顏色的精液應(yīng)予廢棄。
(3)氣味,。豬精液略帶腥味,,如有異常氣味,應(yīng)廢棄,。
(4)pH值(酸堿度),。用pH計(jì)或pH試紙測(cè)量,正常范圍為7.0~7.8,。
(5)精子活力檢查,。精子活力是指呈直線運(yùn)動(dòng)的精子所占百分率,在顯微鏡下觀察,,一般用0.1~1.0的十級(jí)評(píng)分法估計(jì),,鮮精活力要求不低于0.7。檢查活力時(shí)要求載玻片和蓋玻片都應(yīng)在37℃下預(yù)熱,。
(6)精子密度,。指每毫升精液中所含的精子數(shù),是確定稀釋倍數(shù)的重要標(biāo)準(zhǔn),。要求用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)或精液密度儀測(cè)定,。血細(xì)胞計(jì)數(shù)方法:以微量加樣器取具有代表性的原精液200ul,,用3%NaCl稀釋10倍;在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上放一蓋玻片,,取1滴稀釋后的精液置于計(jì)數(shù)板的槽中,,靠虹吸將精液吸入計(jì)數(shù)室內(nèi);在高倍鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)中方格內(nèi)的精子總數(shù),,將該數(shù)乘以50萬(wàn),,即得到原精液每毫升的精子數(shù)(即精液密度)。
(7)精子畸形率,?;温适侵府惓>拥陌俜致剩话阋蠡温什怀^(guò)18%,。其測(cè)定可用普通顯微鏡,,但需進(jìn)行伊紅或姬姆薩染色,用相差顯微鏡可直接觀察活精子的畸形率,。公豬利用過(guò)頻或高溫環(huán)境會(huì)產(chǎn)生精子尾部帶有原生質(zhì)滴的畸形精子,。畸形精子種類很多,。要求對(duì)每頭公豬每2周檢查一次精子畸形率,。
2 精液的稀釋,、分裝和儲(chǔ)存
(1)稀釋液,。稀釋液按稀釋液配方配制(D-葡萄糖37.15,檸檬酸三鈉6.00,,EDTA鈉鹽1.25,,碳酸氯鈉1.25,氯化鉀0.75,,青霉鈉0.60,,硫酸鏈霉素1.00),用稱量紙,、電子天平準(zhǔn)確稱量藥品,;按1000mL和2000mL劑量稱量稀釋粉,置于密封袋中,;在大燒杯或塑料杯中套入一到兩層一次性食品袋,,然后將稀釋粉加入,再將燒杯(或塑料杯)放在電子秤上,,除皮重,;通過(guò)與蒸餾水容器連接的軟管將蒸餾水導(dǎo)入杯中(最初放出的幾毫升水用其它杯接取廢棄),直到將水加至規(guī)定的重量(如1000g即約1000mL),;將杯子放入水浴中加熱,,加熱后輕輕搖動(dòng),,使其徹底溶解。某些稀釋粉遇水后結(jié)塊,,溶解較慢,,需將加熱時(shí)間延長(zhǎng)一些。稀釋粉全部溶解后,,在水浴中繼續(xù)加熱至所需的溫度,。用0.1N稀鹽酸或0.1N氫氧化鈉調(diào)整稀釋液的pH值達(dá)7.2(6.8~7.4)左右,稀釋液配好后應(yīng)及時(shí)貼上標(biāo)簽,、標(biāo)明品名,、配制日期和時(shí)間、經(jīng)手人等,。將稀釋液置于冰箱內(nèi)4℃下保存,,時(shí)間不超過(guò)24小時(shí)。
(2)原精液稀釋后體積計(jì)算,。原精液總有效精子數(shù)=原精液體積(或重量g)×精子密度(單位:個(gè)/mL)×活率,。原精液稀釋后可分裝的份數(shù)=原精總有效精子數(shù)/每份精液中的有效精子數(shù)。原精液稀釋后的體積(或重量)=原精液稀釋后可分裝的份數(shù)(取整數(shù))×每份精液的體積(或重量),。每份精液中有效精子數(shù)推薦為30億,。
(3)精液稀釋。精液采集后應(yīng)盡快稀釋,,原精儲(chǔ)存不超過(guò)30分鐘,。未經(jīng)品質(zhì)檢查或檢查不合格(活力在0.7以下)的精液不能稀釋。稀釋液與精液要求等溫稀釋,,兩者溫差不超過(guò)1℃,,即稀釋液應(yīng)加熱至33~37℃,以精液溫度為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)調(diào)節(jié)稀釋液的溫度,,絕不能反過(guò)來(lái)操作,。稀釋時(shí)用一個(gè)塑料杯(1000~1500mL)放在電子秤上,除皮后將裝精液的采精袋從保溫杯中取出,,放入大塑料杯中,,并將袋口翻在杯外。如果集精容器為一次性紙杯,,則需將紙杯中的精液倒入裝有食品袋的塑料杯中并放在電子秤上,。也可在此時(shí)稱量并記錄精液重量。然后向杯中徐徐加入與精液等溫的稀釋液,,直到達(dá)到所計(jì)算的最終重量,。
(4)精液分裝。一次性輸精瓶的分裝,。將塑料杯中稀釋后的精液分別加入不同的輸精瓶中,,使精液面達(dá)到輸精瓶上相應(yīng)的刻度(如100mL),,然后擰上輸精瓶蓋。一次性輸精袋分裝,。將輸精袋的兩個(gè)懸掛孔掛在專門用于分裝精液的支架上,,在輸精袋中插上一次性塑料漏斗,放在電子秤上,,然后除皮,。將塑料杯中稀釋后的精液通過(guò)漏斗徐徐加入輸精袋中,直到達(dá)到規(guī)定的重量(如100g),,取下漏斗和輸精袋,,掛上一個(gè)新的輸精袋,再將漏斗插入,,分裝另一袋精液,。分裝后的輸精袋用塑料熱封口機(jī)封口。在輸精瓶或袋上標(biāo)明公豬品種,、耳號(hào),、生產(chǎn)日期、保存有效期,、稀釋液名稱和生產(chǎn)單位等,。
(5)精液儲(chǔ)存。將分裝后的輸精容器放入泡沫塑料盒中,,在室溫下緩慢降溫30分鐘后,,再將輸精容器放入17℃恒溫箱內(nèi)的擱架上保存。保存過(guò)程中不要頻繁打開(kāi)冰箱,,并且每隔12小時(shí)輕輕翻轉(zhuǎn)一次,,防止精子沉淀而引起死亡。短效稀釋液可保存3天,,中效稀釋液可保存4~6天,長(zhǎng)效稀釋液可保存7~9天,,無(wú)論用何種稀釋液保存精液,,都應(yīng)盡快用完。